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當(dāng)前位置：首頁產(chǎn)品中心生化檢測試劑盒-常量法離子系列BC5310-50T/48S細胞鐵含量檢測試劑盒 離子

細胞鐵含量檢測試劑盒 離子
產(chǎn)品簡介：

細胞鐵含量檢測試劑盒 離子
儲存條件
2-8℃
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Cell Iron Content Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號：BC5310-50T/48S

更新時間：2024-04-19

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪 問 量 ：1671

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品介紹

細胞鐵含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC5310

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液

液體30 mL×1瓶

2-8℃保存

試劑一

液體15 mL×1瓶

2-8℃保存

試劑二

液體35 mL×1瓶

2-8℃保存

試劑三

液體6 mL×1瓶

2-8℃保存

標準液

液體1 mL×1支

2-8℃保存

溶液的配制： 

1. 標準液：1 μmol/mL Fe3+標準液，臨用前取200μL 1 μmol/mL Fe3+標準液，加入200μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.5μmol/mL標準液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實驗中每管需要100μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）

產(chǎn)品說明：

鐵元素是人體必須的微量元素之一，它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細胞色素及其他酶系統(tǒng)的主要成分，幫助氧的運輸，促進脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紛亂，并影響機體的免疫功能。

鹽酸羥胺將細胞中的Fe3+還原成Fe2+，Fe2+在弱酸條件下與鄰菲羅啉形成橙紅色配合物，在510nm處有吸收峰，測定該波長吸光度即可計算鐵含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機、可調(diào)式移液器、超聲破碎儀、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為1000~2000︰1的比例（建議500萬細胞加入0.5mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率200W，超聲3秒，間隔7秒，重復(fù)30次），于4℃，8000g離心10min，取上清待測。

若樣本為真菌、細菌等有細胞壁的微生物可以適當(dāng)延長超聲時間。

二、測定步驟

1. 可見分光光度計預(yù)熱30min，波長調(diào)至510nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 在1.5mL EP管按下表步驟加樣：

 

 

試劑名稱（μL）

測定管

空白管

標準管

樣本

100

-

-

蒸餾水

-

100

-

標準溶液

-

-

100

試劑一

200

200

200

試劑二

600

600

600

試劑三

100

100

100

充分混勻，25℃靜置顯色10min，于1mL玻璃比色皿中測定510nm處吸光值，分別記為A測定、A空白和A標準，計算ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標準=A標準-A空白?？瞻坠芎蜆藴?/span>管只需做1-2次。

三、細胞鐵含量計算

1. 按細胞數(shù)目計算：

細胞鐵含量（ng/104 cell）=（C標準液×ΔA測定÷ΔA標準）×V提取×103×55.845÷500

=27.922×ΔA測定÷ΔA標準

2. 按蛋白濃度計算：

細胞鐵含量（ng/mg prot） =（C標準液×ΔA測定÷ΔA標準）×V提取×103×55.845÷（Cpr×V提?。?/span>

= 27922.5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr

C標準液：0.5μmol/mL Fe3+標準液；V提?。杭尤胩崛∫后w積，0.5mL；103：單位換算系數(shù)，1μmol=103nmol；55.845：Fe的相對原子質(zhì)量，55.845ng/nmol；500：細胞數(shù)目，500萬；Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。

注意事項：

1、 如果ΔA測定＜0.01，可適當(dāng)加大樣本量后重新測定；如果測定管吸光值大于1，建議將樣本用蒸餾水適當(dāng)稀釋后進行測定。注意同步修改計算公式。

2、 如果按蛋白濃度計算細胞鐵含量，需自行測定樣本上清蛋白濃度。

實驗實例：

1、 取500萬HePG2細胞加入0.5mL提取液進行超聲破碎提取，離心取上清后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.171-0.000=0.171，ΔA標準=A標準-A空白=0.573-0.000=0.573，按細胞數(shù)目計算含量得：

細胞鐵含量（ng/104 cell）=27.922×ΔA測定÷ΔA標準=8.333 ng/104 cell

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